Notre objectif est de comprendre les mécanismes qui déterminent les axes embryonnaires. Ces mécanismes sont à l'origine de la polarisation progressive de l'information maternelle pendant l'ovogénèse, la maturation et les premiers clivages. Les clefs de cette compréhension résident dans les processus de localisation et de l'activation traductionnelle des ARN essentiels pour le développement. Le projet repose sur l'expertise de 3 équipes (Sardet/Houliston/McDougall) et leur réseau de collaborations (Nishida / Standart / King / Deshler / Woodland / Osborne / Manuel). Les résultats espérés sont une compréhension de la conservation des mécanismes des évènements de polarisation chez 2 organismes chordés modèle (ascidie, Xénope) et un nouveau modèle, le cnidaire Clytia, méduse au cycle maitrisé (programme EST engagé). Le projet s'articule autour des thèmes suivant : 1) Localisation des ARNm. Les mécanismes impliqués dans la localisation des ARN messagers dans les plasmes germinaux et dans le cortex des ovocytes de Xénope et d'ascidies seront comparés a ceux mis en œuvre chez Clytia. Nous utiliserons des méthodes d'imagerie haute résolution d' ARN fluorescents in vivo et d' hybridation/immunolocalisation in situ (ARNm Vg1, Xcat2, PEM1, macho1,..). Ces ARNs et leurs proteins de liaison identifiées grace aux approaches de protéomique / génomique avec nos partenaires seront simultanément analysées à l'aide d'anticorps spécifiques et de marquages fluorescents. La manipulation des séquences d'ARN et l'étude du comportement des proteins de liaison à l'ARN permettront d'analyses les relations entre localisation et controle traductionel des ARNm. 2) Maturation meiotique et polarisation des ovocytes. Nous étudierons les liens entre les facteurs de régulation du cycle et la polarisation dans l'ovocyte d'ascidie basé sur notre observation récente que la polarité s'établit lors de la migration du fuseau meiotique vers le cortex. Chez le Xénope, nous examinerons le role des évènements de phosphorylation controlés par les kinases meiotiques dans l'ancrage des ARNm au cortex végétatif et la dérepression concomitante de leur traduction. 3) Réorganisations cytoplasmiques et corticales liées aux facteurs du cycle cellulaire. Cette question sera principalement examinée sur les œufs de la méduse Clytia en utilisant des inhibiteurs spécifiques et la microinjection localisée de régulateurs du cycle (notament Cdc2/cyclinB et ses kinases activatrices). Nous suivrons la localisation et la dynamique des régulateurs de la mitose fluorescents (constructions GFP) grace aux méthodes d'imagerie confocale rapide et déconvolutions. Nous analyserons également le role des vagues de contraction de surface (SCWs) dans l'établissement de la polarité chez les ascidies et chez Clytia. 4) Regulation de la polarité cellulaire au cours du développement précoce. Nous poursuivrons nos recherches sur le role des proteine de polarité s PAR dans les embryons d'ascidies et nous aborderons leur identification et role chez Clytia. Nous préciserons la nature des interactions entre les PAR, les structures corticales et microtubulaires pour comprendre les mécanismes présidant aux divisions inégales (stades 8-64) qui donnent naissance aux lignées germinales et musculaires du tetard d'ascidie. Outre une contribution aux couts de fonctionnement nécessaire nous demandons les financements pour 2 Post Docs qui travailleront entre les équipes et avec les collaborateurs. Au niveau des methodologies, le projet requiert un microscope confocal rapide et sensible qui complémentera notre plateforme d'imagerie et permettra d'analyser in vivo les proteines et ARNm fluorescents impliqués dans les processus de polarisation des oeufs, ovocytes et embryons.