Özet İnsan plasentasından 29.1 kat saflaştınlan alkali fosfatazın spesifik aktivitesi 6.40 IU/mg olarak bulunmuştur. Saflaştırma işlemleri, pH 8.6 tris tamponuyla homojenizasyon, butanol ekstraksiyonu, amonyum sülfatla çöktürme, ısı muamelesi ve Sephadex G-200 jel filtrasyonu basamaklarını içermektedir. Kısmen saflaştınlmış enzimin lineweaver-Burk grafiği çizilerek 37°C'de 0.1M Glisin- lmM Mg^ tamponunda (pH 10.5) p-NPP substratı için Km değeri 0.5 mM olarak saptandı. Enzimin p-NPP substratı için optimum pH'sı 10.6 olarak bulundu. Yapılan ısı ile inaktivasyon çalışmaları sonucunda, enzimin 65°C'de aktivitesinin hemen hemen %100'ünü koruduğu, 78°C'de ise aktivitesinin tamamını kaybettiği gözlemlenmiştir. Daha sonra enzim üzerine teobromin, ferrözsülfat, sodium tiyosiyanat ve etanol'un etkileri denenmiştir. Bunlardan etanol ve ferrözsülfaun enzimi inhibe ettiği ve etanol için inhibisyon tipinin karışık nonkompetetif olduğu, ferrözsülfat için ise inhibisyon tipinin unkompetitif olduğu saptanmıştır. Teobromin ve sodyumtiyosiyanatm enzim aktivitesi üzerine hiçbir etkisi gözlemlenmemiştir.

Summary Alkaline phosphatase of human placenta was purified 29.1 fold with a final specific activity of 6.40 IU/mg by a procedure involving homogenization with tris buffer pH 8.6, extraction with butanol, ammonium sulphate precipitation, exposure to heat and Sephadex G-200 gel filtration. The apparent Km value of the purified enzyme for p-NPP in 0.1 M glycine- ImM magnesium buffer, pH 10.5 at 37°C was calculated (estimated) to be 0.50 mM from Lineweaver-Burk plot. The enzyme had a pH optimum 10.6 for p-NPP. Heat inactivation studies showed that the enzyme remained almost 100% stable at 65°C but it was completely inactivated at 78°C. Subsequently, the effects of theobromine, sodium thiocyanate, ferrous sulphate and ethanol on ALP were investigated. The inhibition type for ferrous sulphate and ethanol were uncompetitive and mixed noncompetitive respectively. However theobromine and sodium thiocyanate did not affect enzyme activity.

97